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核酸凝膠染料泡染法的操作方法及注意事項(xiàng)

 更新時(shí)間:2020-04-20 點(diǎn)擊量:932
  核酸凝膠染料泡染法的操作方法及注意事項(xiàng)
 
  泡染法
 
  (1) 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
 
  (2) 用H2O將MKRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如將15μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
 
  (3) 將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右,zui合適染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時(shí)間通常介于30min到1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng)。
 
  1、此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
 
  2、由于MKRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
 
  3、如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關(guān),請(qǐng)嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長(zhǎng)的凝膠;延長(zhǎng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
 
  4、此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
 
  注意事項(xiàng):
 
  1、用泡染法染色時(shí),染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
 
  2、3× MKRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。

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